营养物质是大球盖菇的生命活动的物质基础，也是获得高产的根本保证。适合做大球盖菇碳源的物质有：葡萄搪、蔗糖、纤维素、木质素等。稻草、麦秆、木屑等可作为培养料。栽培其他蘑菇所采用的粪草料以及棉籽壳反而不是很适合作为大球盖菇的培养料。

从氮源来看，大球盖菇可吸收利用氨基酸、蛋白质及一些无机氮素，但不能直接吸收利用蛋白质，不能利用硝态氮、亚硝态氟。栽培过程中主要通过在培养料中添加铁皮、米糠、豆粉作为大球盖菇氮素营养来源，不仅补充了氮素营养和维生素，也是早期辅助的碳宗营养源。

大球盖菇正常生长还需要一定量的矿质元素。一般栽培大球盖菇所采用的农作物的秸秆原料中完全能够满足大球盖苑对这些矿质元素的需要，不需加任何有机肥，菌丝就能正常生长并出菇。如果在秸秆中加人氮肥、磷肥或钾肥，大球盖菇的菌丝生长反而很差。